https://www.chamfondbiotech.com/4-luuüdi-tüübid--biopsianõelad

I. Mikroanatoomilised alused ja uurimise põhimõtted

1.1 Luuüdi histoloogiline koostis

Luuüdi on inimkeha suurim ja aktiivseim vereloomeorgan, mis moodustab ligikaudu 4–5% kogu kehamassist, kogumahuga umbes 2,6–4,0 kg (70-kg täiskasvanul). Histoloogilisest vaatenurgast koosneb luuüdi kahest põhikomponendist:

Hematopoeetilised parenhüümirakud: Nende hulka kuuluvad vereloome tüvirakud (HSC-d), eri liini eellasrakud ja küpsed vererakud eri diferentseerumise etappidel. Füsioloogilistes tingimustes läbivad vereloome tüvirakud asümmeetrilise jagunemise, et säilitada iseeneslik-uuenemine, diferentseerudes samal ajal müeloidsete (erütroidsete, granulotsüütiliste-monotsüütiliste, megakarüotsüütiliste) ja lümfoidsete (T-rakud, B-rakud, NK{5}}-rakud) radadel.

Hematopoeetiline mikrokeskkond (HME): koosneb retikulaarrakkudest, veresoonte endoteelirakkudest, fibroblastidest, adipotsüütidest, rakuvälisest maatriksist (kollageenikiud, fibronektiin, laminiin jne) ja närvilõpmetest. See mikrokeskkond eritab tsütokiine (nt SCF, TPO, G-CSF, IL-3) ja loob füüsilise karkassi, mis võimaldab peenelt reguleerida HSC kodunemist, proliferatsiooni ja diferentseerumist.

Luuüdi õõnsuses asuvat veresoonte süsteemi iseloomustabsinusoidid​ - õhukeseseinaliste-kapillaaride võrgustik laienenud endoteeli vahedega. Küpsed vererakud läbivad sinusoidaalset endoteeli, et siseneda perifeersesse vereringesse. Nende sinusoidide struktuurne terviklikkus mõjutab otseselt seda, kas aspireeritud proovid muutuvad luuüdi punktsiooni ajal lahjendatuks, ja see on ka oluline morfoloogiline indikaator neovaskularisatsiooni ja ebanormaalse infiltratsiooni hindamisel biopsiaproovides.

1.2 Dünaamiline konversioon punase luuüdi ja kollase luuüdi vahel

Kliiniline korrelatsioon: luuüdi biopsia lõikudel võimaldab HE-värvimine otsest visuaalset eristada punase luuüdi piirkondi (rakutihe, tumedalt määrdunud) ja kollaseid luuüdi piirkondi (rasvavakuoolid, kergelt värvunud). Selle suhte muutused (nt luuüdi rakkude liigitamine) on hematopoeetilise reservi hindamise võtmenäitajad. Luuüdi aspiratsiooni äigepreparaadid ei suuda seda ruumiteavet anda.

1.3 Kahe uurimismeetodi bioloogiline põhjendus

Põhjus, miks luuüdi aspiratsioon ja biopsia diagnostilise väärtuse poolest erinevad, peitub põhimõtteliselt erinevasluuüdi mõõtmed, mida nad "näevad":

Luuüdi aspiratsioonannab avabade rakkude dissotsieerunud suspensioon​ - eeliseks on kõrge-eraldusvõimega morfoloogiline vaatlus ja üksikute rakkude tsütokeemiline värvimine; Puuduseks on rakkude algse ruumilise suhte kadumine koes (kaob info "kes kelle kõrval on").

Luuüdi biopsiaannab akolmemõõtmeline koelõik​ - see säilitab rakkude ja mikrokeskkonna vahelise ruumilise suhte ("naabrusefekt"), kuid fikseerimise ja sektsioonide tõttu kaob raku peened detailid.

Nende kahe suhe on analoogne"Vaadates lahtiste LEGO klotside hunnikut"(püüdlus) versus"vaadates täielikult kokkupandud LEGO mudelit"​ (biopsia) - esimene võimaldab selgelt kontrollida iga tellise kuju ja värvi; viimane paljastab üldise struktuuri ja koostemustri. Kliinilise diagnoosi korral pole kumbki asendamatu.

II. Tööriistade struktuursed erinevused

2.1 Luuüdi aspiratsiooninõelte kujundamise põhimõtted

Kliinilises praktikas kõige sagedamini kasutatavad aspiratsiooninõelad onJamshidi{0}}muudetudvõiRoche{0}}tüüpinõelad. Nende põhikomponendid hõlmavad järgmist:

Tööpõhimõte: Pärast seda, kui nõel tungib ajukooresse ja siseneb medullaarsesse õõnsusse, eemaldatakse stilett ja kuivsüstal kinnitatakse alarõhu tekitamiseks, tõmmates süstlasse luuüdi vedelikku. Alarõhu suurus ja kestus mõjutavad otseselt proovi kvaliteeti - liigne negatiivne rõhk või pikaajaline aspiratsioon põhjustab sinusoidaalse vere massilist sissevoolu, luues "lahjendusartefakti".

2.2 Luuüdi biopsia nõelte kavandamise põhimõtted

Luuüdi biopsia nõelad jagunevad kahte suurde kategooriasse, millel on selgelt erinev disainifilosoofia:

(1) Trefiin / lõikenõelad

EsindasJamshidi biopsia nõel(praegu rahvusvaheline standard):

Tööpõhimõte: Sisemine stilett ja välimine kanüül pööratakse koos luuüdi etteantud sügavusele. Seejärel tõmmatakse stilett välja ja välimist kanüüli pööratakse edasi, et lõigata lühike silindriline luuüdi koest südamik, mis seejärel tõmmatakse koos kanüüliga välja.

(2) Rotary sae nõelad (biopsia mulgustus)

EsindasIslami biopsia nõel, mis kasutab kiiret-pöördlõikemehhanismi. Neid nõelu kasutatakse tänapäeval kliinilises praktikas harvemini ja neid kasutatakse aeg-ajalt teatud kohtades (nt rinnaku biopsia).

2.3 Nõela läbimõõdu erinevuste bioloogiline ja kliiniline tähtsus

Tehniline märkus: Biopsianõela paksem disain ei seisne lihtsalt "rohkema materjali võtmises" -, selle põhieesmärk on tagada, et koesüdamiku läbimõõt on piisavalt suur, et säilitada pärast lõikamist piisav rakkude arv ja ruumiline arhitektuur. Kui südamik on liiga õhuke (<1.5 mm diameter), it is highly prone to fragmentation or distortion during decalcification and sectioning, severely compromising diagnostic value.

III. Põhilised erinevused proovide hankimisel ja töötlemisel

3.1 Luuüdi aspiratsioon: vedela proovi tsütoloogilise analüüsi täielik töövoog

(1) Tehnilised põhipunktid

Süstla valik: A kuiv 10 ml süstalon soovitatav. Kuivus on kriitiline - isegi vähesed niiskuse kogused võivad aktiveerida hüübimiskaskaadi, põhjustades luuüdiproovis enne määrimist hüübimist, mille tulemuseks on katastroofiline olukord, kus rakke pole näha.

Aspiratsiooni helitugevuse reguleerimine: Optimaalne on 0,2–0,5 ml. Liiga vähe (<0.1 ml) may result in insufficient cell density on the smear; too much (>1,0 ml) põhjustab liigset sinusoidaalset vere sissevoolu ja perifeerse vere lahjenemist - määrdumisel on näha rohkesti küpseid lümfotsüüte ja neutrofiile, samal ajal kui lõhkeprotsent "lahjeneb" allapoole, põhjustades kergestivalenegatiivsed tulemused või haiguskoormuse alahindamine.

Aspiratsiooni kiirus: Peaks olemaaeglane ja ühtlaneet vältida ülemäärast hetkelist alarõhku.

(2) Standardne määrimise ettevalmistamise töövoog

(3) Värvimissüsteemid

Rutiinne värvimine: Wright-Giemsa komposiitvärvil on selgelt näha tuumakromatiini mustrid, nukleoolid, tsütoplasmaatilised graanulid ja vakuoolid.

Tsütokeemiline värvimine: sisaldab peroksidaasi (POX), Sudaani must B (SBB), mitte-spetsiifilist esteraasi (NSE), spetsiifilist esteraasi (CE), perioodilist hapet-Schiff (PAS) ja happelist fosfataasi (ACP) -, mis on ägedate leukeemiate FAB-klassifikatsiooni jaoks kriitilised.

Raua värvimine: luuüdi määrde Preisi sinisega värvimine, et hinnata rakusisese ja rakuvälise raua - kuldstandardit rauavaegusaneemia ja kroonilise haiguse aneemia diagnoosimisel.

3.2 Luuüdi biopsia: tahke proovi histopatoloogilise analüüsi täielik töövoog

(1) Kudede omandamise tehnilised põhipunktid

Eelistatud sait: Tagumine ülemine niudelüli​ - õhuke ajukoor, rohke luuüdi, ohutu töö ning optimaalne südamiku pikkus ja kvaliteet.

Sisestusnurk: Luu pinnaga risti, pöörleva liikumisega edasi arenenud.

Omandamise sügavus: Tavaliselt liigub 1,5–2,0 cm; sügavam tungimine suurendab valu ilma diagnostilist teavet oluliselt suurendamata.

Tuuma otsimine: Pärast pöörlevat lõikamist tõmmake välimine kanüül koos südamikuga aeglaselt välja. Nõela otsas on nähtav väike hallikas{1}}valge koeriba (ligikaudu seesami- kuni riisitera-suurune-).

(2) Proovi fikseerimise kriitilised etapid

(3) Katlakivi eemaldamine ja kinnistamine

Luuüdi biopsia kõige unikaalsem ja keerukam{0}}eeltöötlusetapp onkatlakivi eemaldamine:

Põhimõte: Luukoe sisaldab ohtralt hüdroksüapatiidi kristalle, mis tuleb lahustada happeliste katlakivieemaldusainetega (nt EDTA, sipelghappe-formaldehüüdi segud), et kude oleks viilutatav.

Meetodi valik:

EDTA katlakivi eemaldamine​ (soovitatav): kelaativ toime on õrn, säilitab koe antigeenid ja DNA hästi, sobib allavoolu IHC ja molekulaarseks testimiseks; Puuduseks on pikaajaline kestus (3–7 päeva).

Happeline kiire katlakivi eemaldamine(nt lämmastikhappe meetod): kiire (mitu tundi), kuid põhjustab olulist kahju antigeenidele ja nukleiinhapetele, mõjutades potentsiaalselt allavoolu teste.

Parafiini kinnistamine: Pärast katlakivi eemaldamist läbib kude gradiendiga alkoholidehüdratatsiooni, ksüleeni puhastamise, parafiini infiltratsiooni ja kinnitumise parafiiniplokki.

(4) Lõikamine ja värvimine

IV. Diagnostika eeliste põhjalik võrdlus-

4.1 Luuüdi aspiratsiooni ainulaadsed eelised - Süvaanalüüs

(1) Ühe-raku eraldusvõime morfoloogiline diagnoos

Luuüdi määrde suurim tugevus seisneb sellesiga rakk on laiali laotatud​ - hea hajutustehnika korral paigutatakse rakud ühte monokihti ilma kattumiseta. See võimaldab patoloogil uurida iga õlikümbluse all olevat rakku (1000 ×):

Tuumakromatiini jämedus ja jaotusmustrid

Tuumade arv, suurus ja väljapaistvus

Tsütoplasma värvus, graanulite tüübid (asurofiilsed, neutrofiilsed, eosinofiilsed jne)

Rakkude suurus ja morfoloogiline seaduspärasus

See"lahtri -tase" eraldusvõime​ on biopsiaosadega - kättesaamatu 3–5 μm paksustes koelõikudes, tuumad kattuvad sageli vertikaalselt, tsütoplasmaatilised detailid on kokku surutud ja üksikute rakkude täpne klassifitseerimine on äärmiselt keeruline.

(2) Detailne megakarüotsüütide hindamine

Megakarüotsüüdid on luuüdi suurimad rakud (läbimõõduga kuni 50–100 μm). Morfoloogilised kõrvalekalded on mitme häire puhul diagnostiliselt üliolulised:

Määrimisel on need kõrvalekalded kergesti nähtavad; biopsiaosades on megakarüotsüüdid sageli teiste rakkude poolt varjatud ja nende täielikku morfoloogiat on lõigu paksuse piirangute tõttu raske hinnata.

(3) Tsütokeemiliste plekkide kvantifitseeritav väärtus

Tsütokeemilise värvimise tulemused luuüdi määrdumisel võivad ollatäpselt kvantifitseeritud​ - näiteks POX-i positiivsuse määra väljendatakse protsentides (nt "blast POX-positiivsus 85%"), mis on põhikriteerium AML-i eristamiseks ALL-ist. Biopsia osades mõjutavad ensüümi aktiivsust ja kromogeeni ladestumist fikseerimine ja katlakivi eemaldamine, mis annab ainult pool{5}}kvantitatiivseid tulemusi ("nõrgalt positiivne" või "fokaalselt positiivne"), ilma täpsete arvväärtusteta.

4.2 Luuüdi biopsia ainulaadsed eelised - sügav analüüs

(1) Hematopoeetilise vs rasvkoe ruumiline osakaal

Biopsia osades võib punase luuüdi (vereloome piirkond) ja kollase luuüdi (rasvane piirkond) suhe ollavahetult visualiseeritud ja kvantifitseeritud. Tavaline täiskasvanud luuüdi sisaldab ligikaudu 30–50% vereloomekudet ja 50–70% rasva. Selle suhte muutustel on oluline diagnostiline mõju:

(2) Tuumarakkude tiheduse täpne hindamine

Biopsia lõigud võimaldavad arvutadatuumarakkude arv ruutmillimeetri kohtavõi apool{0}}kvantitatiivne rakulisuse hindamissüsteem(5-tasandiline):

See biopsial{0}}põhine rakulisuse hindamine on objektiivsem kui äigepreparaadi - määrded peegeldavad ainult rakkude tihedust "pisikeses fraktsioonis, mis aspireeriti", samas kui biopsia paljastab kogu luuüdi õõnsuse "täieliku panoraami".

(3) Sinusoidse lahjenduse vältimine - peegeldab tõeliselt vereloome seisundit

Aspiratsiooni ajal tõmbab alarõhk paratamatult sinusoidaalset verd koos luuüdi vedelikuga, põhjustades teatud määral lahjenemist. Kuigi kogenud operaatorid saavad seda minimeerida, kontrollides aspiratsiooni mahtu, on seeei saa täielikult kõrvaldada. Biopsia kudede südamikud seevastu ei allu sinusoidsele lahjendusele - sinusoidne veri pestakse fikseerimise ajal ära ja lõigul nähtavad rakud on eranditult parenhümaalsed luuüdi rakud. See on hindamisel eriti olulinehüpotsellulaarne MDSvõivarajane müelofibroos.

(4) Spetsiifiliste haiguste diagnostiline väärtus

(5) "Kuiva kraani" diferentsiaaldiagnoos - Biopsia asendamatu roll

"Kuiv kraan" on määratletud järgmiselt: aspiratsiooninõel on selgelt sisenenud luuüdi õõnsusse, kuid korduvad katsed ei anna vedelikku. Biopsia levinumad põhjused ja diagnostiline väärtus:

V. Piirangud võrreldes - Süvaanalüüs

5.1 Luuüdi aspiratsiooni piirangud

(1) Loodusliku arhitektuuri hävitamine - Mobiilse suhtlusvõrgustiku kadumine

Aspiratsioon hajutab luuüdi koe üheks{0}}rakususpensiooniks. Kuigi see hõlbustab üksikute rakkude uurimist, tähendab seerakkudevahelise ruumilise suhte teabe täielik kadu, sealhulgas:

Võimetus kindlaks teha, kas plahvatused on rühmitatud (ALIP nähtus)

Suutmatus hinnata retikuliinikiudude proliferatsiooni

Suutmatus eristada piire hematopoeetiliste ja rasvatsoonide vahel

See teave on just see, mis on MDS-i ja müelofibroosi diagnoosimisel kõige olulisem.

(2) Sinusoidne lahjendus - "Vähemaks muutumise" oht

Isegi kõige kogenumates kätes sisaldavad aspiratsiooniproovid paratamatult teatud osa sinusoidaalset verd. Uuringud näitavad, et ligikaudu10–30% rakkudest rutiinse luuüdi aspiraadi määrdumisel pärinevad sinusoidaalsest lahjendamisest. See lahjendusefekt on eriti väljendunud:

Over-aspiration (>1 ml)

Liiga kiire aspiratsioon

Patsiendid, kellel on märkimisväärne hüpersplenism (kiirenenud sinusoidne vool)

Sisemiselt hüpotsellulaarne luuüdi (vähem normaalseid rakke, suurem lahjendusaste)

Tagajärg: löövete protsente alahinnatakse, suure{0}}riski MDS-i liigitamine madala-riskiga riskirühmaks või AML-i diagnoos puudub täielikult.

(3) Kuivkraan - Läbivaatuse ebaõnnestumise ummiktee

Nagu ülalpool kirjeldatud, ei anna aspireerimisel kuiva koputamise korral kehtivat proovi. Ilma järgneva biopsiata seisab patsient silmitsi pikaajalise diagnostilise lünga ja potentsiaalselt täiendava valuga korduvate protseduuride tõttu.

5.2 Luuüdi biopsia piirangud

(1) Raskused rakutüübi tuvastamisel - "Näo pimedus rahvahulgas"

3–5 μm paksustes koelõikudes kattuvad tuumad vertikaalselt ja tsütoplasma surutakse kokku, mille tulemuseks on:

Raskused müeloblastide eristamisel monoblastidest (POX-värvimine määrdumisel lahendab selle)

Aeg-ajalt võimetus eristada erütroidi prekursoreid lümfotsüütidest

Äärmuslikud raskused mikromegakarüotsüütide tuvastamisel

Seega, kuigi biopsia võib teile öelda, et "siin on palju tihedalt pakitud rakke", siis seeei saa teile täpselt öelda, mis need rakud tegelikult on.

(2) Peente intratsellulaarsete struktuuride piiratud visualiseerimine - "Ebapiisav pikslieraldusvõime"

Töötlemisetapid - fikseerimine (formaliin), katlakivi eemaldamine (happeline keskkond) ja kinnistamine (kuumutatud parafiin) - põhjustavad teatud määral rakkude kokkutõmbumist ja moonutusi:

Nukleoolid võivad muutuda ebaselgeks või kaduda

Tsütoplasmaatilised graanulid võivad lahustuda või positsiooni muuta

Aueri vardaid (mis on iseloomulikud AML-ile) on lõikude lõikes äärmiselt raske tuvastada

Määrdudel on need peened struktuurid värskelt fikseeritud või peaaegu{0}}elusrakkudes selgelt nähtavad.

(3) Tsütokeemiliste plekkide kvantifitseerimise raskused - "Kvalitatiivne, kuid mitte kvantitatiivne"

Nagu märgitud, mõjutab töötlemine ensüümi aktiivsust ja antigeeni säilimist biopsiaosades. Tsütokeemilised värvimistulemused on enamasti pool{1}}kvantitatiivsed (nt "positiivsed" või "nõrgalt positiivsed"), millel puuduvad määrdumisel saavutatavad täpsed protsendiväärtused. See on selge puudujääk ägedate leukeemiate täpse alatüübi määramisel.

VI. Täiendav seos kliinilistes otsustes-tegemine - juhistest praktikani

6.1 Peamiste juhiste soovitused

6.2 Standardne "Üks punktsioon, üks biopsia" strateegia

Suured rahvusvahelised hematoloogiakeskused võtavad selle strateegia laialdaselt kasutuseleühekordne anesteesia, üks punktsioonikoht (niudeluu tagumine ülemine osa), järjestikune aspiratsioon, millele järgneb biopsia:

6.3 Haiguse -spetsiifiline valikustrateegia

6.4 Ülevaade tüüpilisest juhtumist

Juhtum: Mees, 68 aastat vana, progresseeruv väsimus ja splenomegaalia. CBC: Hb 82 g/L, WBC 4,2×10⁹/L, PLT 58×10⁹/L. Perifeerne määrdumine näitab aeg-ajalt pisarakke.

Ainuüksi püüdlus: võib anda veidi lahjendatud proovi, mis näitab "hüpotsellulaarsust väheste ebanormaalsete rakkudega" -, mis ei ole lõplikuks diagnoosimiseks piisav; võib valesti diagnoosida kui "hüpotsellulaarne MDS".

Biopsia üksi: näitab märgatavat fibroosi ja rühmitatud blasteid, mis viitab PMF-ile, kuid täpne blastide klassifitseerimine oleks võimatu.

Kombineeritud: määrdumine näitab vasakpoolset-nihket granulopoeesi ebaküpsete müeloidrakkudega; biopsia näitab MF-2 fibroosi, positiivset ALIP-i ja ebanormaalset megakarüotsüütide morfoloogiat – terviklik diagnoos:primaarne müelofibroos (prefibrootiline / varajases staadiumis) koos MDS-i tunnustega, mis annab täpse aluse järgnevaks raviks.